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体外转录的步骤有哪些

作者:王熙
2020-01-28
百科

转录通常发生在生物体内,如果我们将含有RNA转录酶、NTP等条件,在体外无细胞系统中,用DNA作为模板,模仿体内转录过程生成RNA,这样的技术则能够控制转录的基因、转录的过程和转录后RNA的用途,该技术被称为体外转录。

体外转录的步骤如下:

1. 提取cDNA质粒;

2. 线性化质粒;

3. 纯化质粒: 加等体积的Tris苯酚氯仿到100微米限制内切酶消化体系,涡旋振荡20秒, 13000克离心5分钟。上清转移,加入2倍体积无水乙醇和1比10体积的的醋酸钠负20摄氏度放置不少于2小时或过夜放置。DNA质粒13000克离心5分钟 ,并且用20微升的水重悬,放于负二十摄氏度;

4. 体外转录;

5. 在37摄氏度至42摄氏度下放置2小时;

6. 转录产物可通过百分之一非变性琼脂糖来检测:取产物1微升,160伏电压,结果应为两条带, 上为DNA模板,下为RNA 产物。

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