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基因组文库构建的方法与过程分别是什么

作者:王书一
2020-03-06
百科

方法:限制性酶切法、机械剪切法。

过程:1.载体DNA片段的制备。

2.供体DNA片段的制备。

细胞中总DNA分离,纯化机械剪切法分离特定大小DNA片段。限制性酶切,分离特定大小DNA片段。

3.供体与载体DNA连接。

4.重组DNA分子的转移和基因组文库的扩增。

利用转化或感染方法将连接DNA分子导入宿主细胞,让其自主复制,重组DNA分子被扩增。

5. 基因组文库质量的评价。

文库规模:随机挑取一些转化子或重组子,提取质粒DNA,电泳测定插入片段大小,然后根据上述公式计算文库大小。

重组频率:频率越高,质量越高,可大大减轻后续筛选基因工作量。

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